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小鼠端粒长度检测试剂盒的标准化操作流程分享

发布时间： 2025-11-14　　点击次数： 221次

　　端粒是染色体末端的保护性DNA-蛋白复合结构，其长度随细胞分裂逐渐缩短，被视为细胞衰老与寿命的重要生物标志物。在衰老机制、抗衰老药物筛选及疾病模型研究中，准确测定小鼠端粒长度至关重要。使用小鼠端粒长度检测试剂盒虽操作便捷，但若步骤疏漏，易导致数据偏差、重复性差甚至假阳性结果。掌握小鼠端粒长度检测试剂盒的标准化操作流程，是获取可靠科研数据的前提。

　　一、实验前准备：样本与试剂管理
　　样本采集规范：取小鼠新鲜血液、脾脏或尾尖组织，迅速冻存于-80℃，避免反复冻融；
　　DNA提取质量控制：使用高纯度基因组DNA提取试剂盒，确保A260/A280比值在1.8-2.0之间，浓度≥20ng/μL；
　　试剂平衡与配制：将试剂盒内所有组分室温平衡30分钟，按说明书精确配制qPCR反应液，避光操作防止荧光染料降解。
　　二、qPCR体系构建关键要点
　　引物特异性验证：确认试剂盒所含端粒（Tel）与单拷贝参考基因（如36B4、Gapdh）引物适用于小鼠基因组；
　　模板用量一致：每孔加入等量DNA（通常5-20ng），避免因浓度差异影响Ct值；
　　设置完整对照：
　　阳性对照（已知端粒长度样本）；
　　阴性对照（无模板NTC）；
　　技术重复（每样本至少3个复孔）；
　　避光加样：使用低吸附枪头，轻柔混匀，离心去除气泡。
　　三、qPCR程序运行与数据分析
　　严格遵循推荐程序：通常为95℃预变性10min，随后40个循环（95℃15s+60℃1min）；
　　熔解曲线分析：确认端粒与参考基因扩增产物为单一峰，排除引物二聚体干扰；

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