小鼠端粒长度检测试剂盒.

小鼠端粒长度检测试剂盒使用说明书(定量PCR法)

【产品规格】

1. TLM50   50 * 2 * 3  Reaction

【产品说明】

端粒（Telomeres）：是真核生物线性染色体末端的非编码串联重复性(TTAGGG)n阵列，端粒长度的变化，与衰老、癌症、或神经退行性等多种疾病相关。定量PCR法是检测端粒长度的经典技术，用时短，操作简单，结果准确，适用于批量样本检测。

本产品试剂盒采用荧光 qPCR（SYBRgreen）检测端粒长度，检测对象为血液、组织DNA或细胞DNA 。该试剂盒具有以下特点。

1.       稳定：全程闭管操作，无交叉污染。

2.       方便：操作简单，无需电泳步骤。

3.       相对定量：引入一个端粒长度检测的标准品，用于构建标曲得到拟合方程，可获得样品的相对长度（T/S）。

【运输及保存条件】

低温冷冻运输， -20℃保存，有效期 6个月，冻融以后，4℃保存，有效期2周。

【产品组分】

注：本试剂盒提供试剂，使用前请上下轻柔颠倒十次混匀，后低速离心、小心开启。避免起泡。实验时，操作须全程在冰上进行 。Biowing®Telomere Detection Mix 启用后避免反复冻融，使用结束后置于4℃保存，两周内使用完毕。Standard 1是C57幼鼠鼠尾DNA，浓度为40ng/μ L，用于构建标准曲线，端

粒具体算法见附录2。

【操作步骤】

1. 样品准备及质控

端粒长度检测与样本质量相关性较大，DNA 质量要求较高，如果对一批样本进行检测，若利用不同提

取方式或者不同提取试剂盒提取的 DNA，以及质量较差的 DNA，我们建议对样本 DNA 进行纯化，保证样本的均一化。纯化的方式本方案采用磁珠分选的方法，具体步骤见附录 1。若采用其他纯化方式如乙醇法纯化、过柱纯化，可自行尝试；纯化后的 A260/280 及 A260/230 的比值基本相同，在 1.3-2.0 之间。

将样本浓度标化至10ng/µL，上样2µL 。标准品的DNA浓度标化至20ng/µL ，按2倍、4倍、8倍浓度梯度稀释后，上样2µL ，用于构建标准曲线（其中端粒通道DNA上样量40ng 、20ng 、10ng 、5ng；内参通道

DNA上样量为40ng 、20ng 、10ng）。

2. qPCR反应液的准备

(1)    根据所要检测样品的数量，计算所需反应孔数，每个样本两个基因，分别做3个重复孔。端粒反应孔数=（Standard1 ×4 个梯度）× 3 +（ 样本数）× 3

内参反应孔数=（Standard1 × 3 个梯度）× 3 +（ 样本数）× 3

(2)    根据反应孔数计算所需的 Mix 总量（含有 1孔的加样损失量）： Mix（端粒或内参） =（反应孔数+1）× 18μl

(3) 各试剂放 2-8℃条件下融化，并根据下表所示准备 qPCR Mix：

端粒通道

内参通道

3. 加样

（1）震荡混匀 qPCR Mix，低速离心，将管盖残留液体收集至管底。

（2）向每孔反应管中分装 18μL qPCR Mix。

（3）向已分装过 qPCR Mix 的反应管中加入10ul石蜡油。

（4）向反应管中加入样品后短暂离心，加样示例如下：