实验操作指南：翼和端粒酶检测试剂盒的5个操作分区

📝 正文

做qPCR实验的人都知道，分区操作是防止污染、保证结果可靠的关键。翼和生物的端粒酶催化亚基TERT基因表达检测试剂盒，对实验室分区有明确的要求，总共分为5个操作区。

今天，我们就来详细介绍这5个分区，以及每个分区的功能和注意事项。

为什么要分区操作？在介绍分区之前，我们先说说为什么要分区。

qPCR的灵敏度非常高，极微量的核酸污染都可能导致假阳性结果。特别是对于端粒酶检测这种检测低丰度基因的实验，污染的影响更大。

分区操作的目的就是将实验的不同环节在物理空间上隔离开，防止扩增产物、阳性对照等污染样本和试剂，从而避免假阳性结果。

一般来说，qPCR实验至少要分为试剂准备区、样本制备区和扩增分析区三个区。但翼和生物的试剂盒因为涉及到RNA抽提、反转录，而且有阳性对照，所以分得更细，总共5个区。

分区一：试剂准备区功能：试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。

存放物品：混合液试剂及相关的耗材。

仪器设备：冰箱（4℃和-20℃）、离心机、加样器、振荡器等。

注意事项：

￮        这是最"干净"的区域，只能存放试剂，不能放任何样本、阳性对照、扩增产物等。

￮        进入这个区要穿专用的工作服，戴手套。

￮        加样器要专用，不能拿到其他区使用。

￮        实验结束后对台面进行紫外灯消毒。

分区二：样本前处理区功能：RNA样本抽提和短暂保存。

存放物品：RNA抽提试剂及耗材应保存至该区域。

仪器设备：超净工作台、冰箱、低温高速离心机、加样器、振荡器等。

注意事项：

￮        这个区主要进行RNA抽提操作，要注意防止RNase污染。

￮        超净工作台要保持清洁，实验前紫外消毒。

￮        抽提好的RNA可以短暂保存在这个区的冰箱里，但建议尽快进行反转录。

￮        不同操作区的仪器、试剂、耗材不可混用。

分区三：样本制备区功能：RNA样本的逆转录，cDNA样本稀释，样本加样，阴性对照也在该区域完成加样。

存放物品：逆转录试剂和耗材存放在该区域。

仪器设备：超净工作台、冰箱（4℃和-20℃）、离心机、加样器、振荡器等。

注意事项：

￮        这个区主要进行反转录和样本加样操作。

￮        阴性对照在这个区加样，不要拿到阳性对照区去。

￮        加样顺序建议：空白对照→阴性对照→样本→阳性对照（阳性对照在阳性加样区加）。

￮        实验结束后及时处理废弃枪头，台面消毒。

分区四：阳性对照加样区功能：阳性对照样本的稀释、加样。

储存物品：阳性样本存放在该区域。

仪器设备：生物安全柜（或超净工作台）、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。

注意事项：

￮        这是最"脏"的区域，因为有高浓度的阳性对照cDNA，很容易造成污染。

￮        这个区的所有物品都要专用，绝对不能拿到其他区使用。

￮        进入这个区要穿专用的工作服，最好和其他区的工作服颜色不一样，防止混淆。

￮        加样时要特别小心，避免产生气溶胶。

￮        实验结束后要消毒，包括台面、仪器等。

分区五：扩增分析区功能：主要进行荧光定量PCR反应，也可以进行逆转录反应。

仪器设备：荧光定量PCR仪、普通PCR扩增仪。

注意事项：

￮        这个区主要放PCR仪，加好样的PCR板拿到这个区上机。

￮        扩增结束后，PCR产物不要拿到其他区去，直接在这个区处理。

￮        仪器要定期维护和校准。

￮        实验结束后对仪器和台面进行消毒。

通用注意事项除了每个分区的特定注意事项，还有一些通用的注意事项：

a.       单向流动：实验流程应该从试剂准备区→样本前处理区→样本制备区→阳性对照加样区→扩增分析区单向流动，绝对不能反向走。

b.      物品专用：不同区的仪器、试剂、耗材、工作服都要专用，不能混用。

c.       消毒制度：每天实验后使用75%的酒精、核酸清除试剂进行台面消毒；超净工作台每天实验后用75%酒精、核酸清除试剂擦拭；实验室完成后对实验室、操作台面进行紫外灯消毒。

d.      废弃物处理：实验结束后废弃的枪头及时处理，废液缸喷洒次氯酸钠。

e.       加样顺序：样本的加样顺序是空白对照→阴性对照→样本→阳性对照，这样可以减少污染的风险。

没有5个区怎么办？可能有些实验室条件有限，达不到5个分区的要求。这时候可以灵活处理，比如：

￮        至少要保证试剂准备和样本制备分开，扩增区单独。

￮        阳性对照的加样可以在生物安全柜里进行，用完后消毒。

￮        不同的实验步骤在不同的时间进行，中间消毒。

当然，如果条件允许，还是建议严格按照5个分区来设置，这样实验结果更可靠。

翼和生物的端粒酶检测试剂盒，不仅产品性能优异，还提供详细的操作指导，帮助你获得可靠的实验结果。