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二代测序

二代测序

更新时间:2024-03-27

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简要描述:
二代测序又叫重亚硫酸盐扩增子测序(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS)。翼和生物DNA甲基化测序可以对目标区间进行高通量的甲基化重测序分析,精确计算每个位点的甲基化率,进行单碱基分辨率的定量分析,性价比高。
品牌Biowing

二代测序介绍:

表观遗传学(epigenetics)是目前分子生物学研究的热点之一,DNA甲基化测序是表观遗传学的重要内容,是基因组DNA的主要表观遗传修饰形式之一。DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(DNMTs)的催化下,将甲基基团转移到胞嘧啶碱基上的一种修饰方式。它主要发生在富含双核苷酸CpG岛的区域。正常情况下CpG岛是以非甲基化形式(活跃形式)存在的,DNA甲基化可导致基因表达沉默。DNMTs的活性异常与疾病有密切的关系。对于维持正常细胞功能、传递基因组遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生,起着至关重要的作用。

上海翼和生物通过亚硫酸氢盐(bisulfite)处理,用多重PCR扩增目的片段,添加barcode和测序通用接头,在Illumina X10二代测序平台对PCR产物进行高通量测序,利用生物信息学方法,精确定量计算目标区间内的甲基化位点的甲基化状态,在完成目标区域检测的同时大幅降低研究费用。

Hi-MethylSeq结合了亚硫酸盐转换、靶向扩增子高通量测序技术,可实现多区段、多位点的甲基化精确定量分析。本方法适用于感兴趣的目的片段的甲基化研究,在大样本中进一步确认全基因组甲基化研究挑选的阳性位点。

重亚硫酸盐处理是DNA甲基化测序中基因组DNA处理的金标准,是一个化学过程,可造成DNA的损伤,很难同时实现100%的转换效率和保持DNA的完整性,二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq目标区域之外选取3段非CpG岛序列作为内对照,准确评估样本的转化率。

 

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