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支原体高灵敏度试剂盒规范的操作流程分享
发布时间： 2025-09-10 点击次数： 45次在细胞培养、生物制药与临床诊断领域，支原体污染是威胁产品质量与实验结果的原因。支原体高灵敏度试剂盒凭借PCR或酶联免疫等技术，可检测低浓度的支原体DNA或抗原。其检测结果的准确性高度依赖于规范的操作流程。掌握支原体高灵敏度试剂盒的标准使用方法，是确保警报真实可靠的关键。
第一步：环境准备与试剂预处理在独立的洁净区（如生物安全柜）进行操作，避免交叉污染。将试剂盒从-20℃冰箱取出，室温（15-25℃）平衡15-30分钟。检查各组分是否齐全、无破损、无污染。严禁反复冻融试剂，使用后立即放回低温保存。准备好无菌离心管、移液器及滤芯吸头。第二步：样本采集与处理细胞培养液：取1-5mL上清液，4℃10,000×g离心5-10分钟，弃沉淀，取上清用于检测；血清/生物制品：直接取样或按比例稀释；组织样本：匀浆后离心取上清。所有操作需无菌进行，防止外源DNA/RNA污染。样本应新鲜或-80℃保存，避免反复冻融。第三步：反应体系配制根据说明书计算所需反应液总量（阴性对照、阳性对照、待测样本）。在冰上解冻引物、探针、酶混合液。使用单通道或多通道移液器，按顺序加入缓冲液、酶、引物等，轻轻混匀，短暂离心去除气泡。每批次必须包含阴性与阳性对照，以验证实验有效性。第四步：加样与扩增/孵育将配制好的反应液分装至PCR管或微孔板。依次加入处理后的样本、阴性对照、阳性对照（各10-20μL），盖紧管盖或封板膜。放入实时荧光PCR仪或酶标仪，设置正确的程序：PCR法：预变性→40个循环（变性-退火-延伸）→熔解曲线分析；ELISA法：37℃孵育30-60分钟→洗板→加酶标抗体→再孵育→显色→终止。严格控制温度与时间。第五步：结果判读与记录PCR法：观察扩增曲线是否呈“S”型，Ct值是否在有效范围。阳性样本Ct≤35且熔解曲线峰形正确；阴性对照无扩增；阳性对照有扩增。ELISA法：用酶标仪读取OD值，计算样本与临界值（CO）的比值（S/CO）。S/CO≥1.0判为阳性。记录所有数据，保存原始图谱或OD值表格，建立检测档案。- 下一篇：没有了
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