6种牛源病毒核酸qPCR检测方案

牛源血清的分类

新生牛血清（Newborn Calf Serum, NBCS）

研究本品系从出生14小时内未进食的新生牛采血分离血清，经除菌过滤后制成。牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。含有丰富的氨基酸、维生素、碳水化合物、脂质等，为细胞提供生长所需的能量和物质基础。

胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）

取自胎牛，特别是5-8个月大的胎牛，器官发育正处于关键阶段，其血清中含有丰富的生长因子，适合细胞培养使用。

小牛血清（Calf Serum）：

取自出生后3天至六月龄的小牛，平衡的成分使其在细胞培养中扮演稳定支持者的角色。常规传代细胞系（如 HeLa、CHO、HepG2）、悬浮细胞培养时使用。

成年牛血清（Adult Bovine Serum, ABS）：

来源于成年牛，个体差异较大，血清中含有抗体等不利于病毒生产的成分，多用于提取制备牛血清白蛋白，适应对血清性能要求较低、成本敏感、细胞耐受性强的细胞培养，在一些特殊的科研领域有所应用。

牛源血清的检测方案

在2025年《中国药典三部》中要求对新生牛血清至少检测6种病毒检查，即：牛腹泻病毒（BVDV）、牛细小病毒（BPV）、牛副流感病毒3型（BPI3)、呼肠孤病毒3型（Reo-3)、牛腺病毒（BAV-3）和狂犬病病毒（Rabies）。并要求进行细胞培养法和荧光抗体检测，结果均应为阴性。细胞病变观察（CPE）可用于检测牛腹泻病毒、Ⅲ型呼肠孤病毒、Ⅲ型牛副流感病毒这三种病毒。血吸附检查（HAd）可检测Ⅲ型牛副流感病毒。荧光抗体检测（IF）范围更广，包括以上6种病毒。这些规定确保了牛血清检测的标准化和规范性。

新生牛血清除去病毒检测外，还需要进行生化指标、细菌内毒素、无菌、支原体等方面的检查。

此外，2025版《中国药典三部》（通则0234 生物制品生产用动物细胞基质制备及质量控制）中，“细胞内、外源病毒因子检查"项下增加“分子生物学方法"，包括核酸扩增法（NAT）和二代测序法（NGS）。

上海翼和采用2个牛源病毒检测试剂盒，每个试剂盒同时检测DNA和RNA病毒。第一套试剂盒（BP-01）中4套引物探针在FAM（牛细小病毒）、HEX（狂犬病病毒）、ROX（Ⅲ型呼肠孤病毒）三个通道检测三种病毒，另一套引物探针在CY5通道检测内参RNA；其中BPV是DNA病毒，RV和Reo-3是RNA病毒。第二套试剂盒（BP-02）中采用4套引物探针在FAM（Ⅲ型牛副流感病毒）、HEX（牛腹泻病毒）、ROX（Ⅲ型牛腺病毒）三个通道检测三种病毒，另一套引物探针在CY5通道检测内参RNA；其中BAV-3是DNA病毒，PI3和BVDV是RNA病毒。试剂盒采用逆转录、荧光定量一步法操作，可同时快速检测DNA和RNA病毒。灵敏：检测灵敏度可达到10¹ copies/μL。稳定：全程闭管操作，无交叉污染。可靠：含内参基因，避免假阴性。方便：操作简单，一步法检测。