大小鼠病毒核酸荧光定量PCR多重检测方案

国标GB14922－2022 中大鼠小鼠病毒检测项目

国标GB14922－2022中大小鼠的病毒必须检测项目如下：

Ⅲ型呼肠孤病毒Reo-3、仙台病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV、汉坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠细小病毒MVM、大鼠细小病毒KRV、大鼠细小病毒H-1。

国标GB14922－2022中大小鼠的病毒必要时检测项目如下：

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒LCMV、大鼠冠状病毒RCV、鼠痘病毒Ect、小鼠脑脊髓炎病毒TMEV、多瘤病毒POLY。

小鼠诺如病毒MNV是免疫缺陷小鼠的必须检测项目。

以上病毒大多数病毒是RNA病毒，但是小鼠细小病毒MVM、大鼠细小病毒、鼠痘病毒Ect、多瘤病毒POLY是DNA病毒。

常用病毒检测方法

常规样本的病毒检测方法，多采取血清学方法，GB14922中对各种病毒的检测有详细的描述，包括病毒抗原制备、抗体标记，以及检测流程及结果读取。血清学检测方法包括：酶联免疫吸附试验ELISA，免疫酶试验IEA，免疫荧光试验IFA等抗体检测方案。抗体检测的缺点是无法区分当前感染还是既往感染，也不能用作诊断免疫缺陷小鼠（无法产生抗体）和病毒早期感染（抗体还未产生），容易导致漏检。但是可以了解既往感染史。

除此之外，随着分子生物学检测方法的进步，荧光定量PCR成为用于检测病毒感染的常用的方法。其中RNA病毒需要进行额外的逆转录过程转为DNA，再进行后续的检测。荧光定量PCR检测是通过检测荧光信号的强弱来判断是否存在病毒或病毒含量的高低。不同的荧光标记物也使得多重检测成为可能，比如一个反应体系内可见检测多重荧光FAM、HEX、ROX 荧光，每种荧光探针标记1-3种病毒，从而可以实现一个孔中多种病毒的检测。

荧光定量PCR检测病毒时所需的样本量少、更是可以在疾病早期检测到病毒感染，特异性高，也得到了广泛的应用和重视。核酸PCR检测需要防污染措施。首先针对特定核酸区段，设计特异性的病原体检测引物，确保都能精准识别目标病原体，有效避免非特异性扩增带来的假阳性。具体的样本检测过程需要设置阳性对照，可通过观察阳性对照的扩增曲线，判断qPCR过程是否正常。翼和生物开发的大小鼠病原体qPCR检测试剂盒可同时检测多种病毒。分两种试剂盒，一种qPCR试剂盒是联检试剂盒，能判断样本是否感染国标规定的几种病毒，并且出现阳性的话可锁定在2-3种病毒的范围，但是确定具体哪种病毒感染则需要搭配鉴定试剂盒进行具体病毒的鉴定。但是一般SPF来源的鼠样本都是比较干净，检测常为阴性，所以无需进行特定病毒的鉴定。联检试剂盒：国标病毒必检八项、国标病毒选检六项。联检试剂盒中一个荧光通道可以同时检测2-3种病毒体，但是不区分这2-3种病毒，也就是说一旦这个荧光通道有信号阳性，那么这2-3种病原体都有可能是阳性。5款鉴定试剂盒。鉴定试剂盒中一个荧光通道只鉴定一种病毒，所以可以通过荧光通道直接判断感染的具体病毒。

荧光定量PCR检测灵敏度高、特异性强，一般高于10 copies/μl的核酸病毒样本可被检测到。

一旦实验动物自身携带一些病毒，不仅可能导致实验数据失真，还可能造成大量科研资源的浪费，构建一套高效、精准的实验动物质量检测和管理体系，是保障动物实验正常进行的重要环节。