大小鼠中绿脓杆菌、产酸克雷伯菌、奇异变形杆菌 3种常见病原菌的检测

三种常见病原菌

绿脓杆菌（Pa）是革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界中，常寄生于人和动物的体表、呼吸道、消化道，免疫力下降是重要的发病诱因，在烧伤感染中绿脓杆菌检出率较高。绿脓杆菌是SPF级小鼠必检项目, 主要定植于肠道内和粪便中。对实验动物而言，SPF 小鼠及无菌小鼠被绿脓杆菌感染后，多数不表现症状，当宿主免疫系统受损，常可引起感染、炎症、败血症甚至死亡等。但进行医药、生物制品实验时，常影响试验结果，导致实验的失败，故绿脓杆菌已被列为无特定病原体小鼠必须排除的细菌之一。

产酸克雷伯菌(Ko)是克雷伯菌属中的一个重要物种，形态呈直杆状，大多数菌株具有多糖荚膜，无鞭毛，无芽孢。产酸克雷伯菌目前未被列为SPF级动物必须排除的病原体。但是产酸克雷伯菌是实验室常见病原菌，被杰克逊（JAX）实验室明确列为“排除性病原体"，即其供应的所有品系实验动物（尤其是免疫缺陷品系）均要求无此菌定植。免疫缺陷小鼠是该菌的高风险群体，研究发现，免疫缺陷小鼠中产酸克雷伯菌的检出率达4.55%。

奇异变形杆菌（Pm）属于变形杆菌属，是一种重要的条件致病菌。菌体呈直杆状，具有周身鞭毛，因此运动性非常活跃。显著的特征之一是在固体培养基（如营养琼脂）上的“迁徙生长"或“群游"现象。

常见病原菌的检测

这三种菌在清洁级实验动物中检出率较高，检测目前多采用培养法的检测方法, 即通过分离培养、菌落形态特征和生化反应特征来确定动物体中是否感染病原菌。通过几天的培养后观察病原菌的形态、染色等生化反应，判断菌的种类，这种检测方法对实验人员的经验要求比较高，培养时间比较长，需要一种快捷的检测方案实现三种菌的检测，并且检测准确度高，灵敏度高。

当前检测病原菌的一种有效的手段是qPCR的检测方案。翼和生物开发的Biowing®SPF级大小鼠常见病原菌qPCR检测试剂盒，采用高灵敏度和特异性的探针法qPCR技术，专为在多种样本类型中快速、高灵敏地筛查SPF级实验室大小鼠常见的病原菌而设计，可快速检测绿脓杆菌（Pa）、产酸克雷伯菌(Ko)、奇异变形杆菌（Pm）常见病原菌。一管中分别在FAM（铜绿假单胞菌Pa），HEX（产酸克雷伯菌Ko），ROX（奇异变形杆菌Pm）三个通道检测3种病原菌。另外设计一套引物探针在CY5通道检测内参DNA。该试剂盒具有以下特点：灵敏：检测灵敏度较高，10 CFU可被有效检出。稳定：全程闭管操作，无交叉污染。可靠：含内参对照，避免假阴性。方便：操作简单，一步法检测。