突破检测瓶颈：基于 qPCR 的 CHO 宿主残留 DNA 检测新方案

背景与现有问题

安全风险与监管要求：种源和生产工艺导致的宿主细胞残留 DNA，给预防性或治疗性生物制品带来潜在安全风险。多数国家监管单位对其含量和长度有明确规定，如 2020 版《中国药典》规定以 CHO 细胞为基质生产的制剂，残留 DNA 含量不得高于 10 pg / 剂量。

现有检测手段的局限：

1.荧光定量 PCR 方法因灵敏性、准确性等优势应用广泛，相关公司也开发了多种试剂盒，但前处理试剂盒成分不太明确且价格高昂。

2.免前处理检测方案和基于数字 PCR 的新一代检测方案虽有报道，却未成为广泛应用的标准。

3.残留 DNA 长度低于 200 bp 时一般认为无致癌风险，但研究发现部分疫苗中仍有少量超过 1000 bp 的片段。现有检测残留 DNA 片段化程度的手段（如毛细管电泳、改进的微流控电泳）成本高且操作耗时。

4.肿瘤研究中已有通过 qPCR 检测体液游离 DNA 片段化程度的方法，但鲜少用于生物制品中宿主残留 DNA 片段化程度的直接检测。

本试剂盒优势

为解决现有检测方法的不足，开发出 CHO 宿主细胞残留 DNA 检测方案，该方案具有以下特点：

1.线性范围良好：在 0.1 ng/µl-1 fg/µl 范围内线性良好，标准曲线 R²＞0.99。

2.检测能力达标：定量限为 0.5 fg/µl，与相关研究报道的检测能力一致，达到国内外现有 CHO 残留 DNA 检测试剂盒相同水平。

3.性能符合要求：专属性、重复性、耐用性、回收率等经过验证均符合要求。

4.可判断样本大小：长短片段 ΔCt 与样本片段大小拟合曲线相关性高，可用于对样本大小进行直接判断。

该研究为生物制品中 CHO 宿主细胞残留 DNA 的检测提供了一种新的有效方案，在提高检测效率、降低成本等方面具有潜在价值。