生物制药领域支原体检测的主流方法

生物制药领域支原体检测的主流方法

在生物制药领域，支原体污染可能影响产品安全性和有效性，因此检测方法需具备高灵敏度、特异性和可靠性。目前该领域支原体检测的主流方法如下：

一、核酸扩增法（NAT-PCR ）

原理：通过设计针对支原体保守基因的特异性引物，利用 PCR 或实时荧光定量 PCR（qPCR）技术扩增样本中的支原体核酸，通过荧光信号或电泳结果判断是否存在污染。
特点（qPCR法）：

灵敏度高：配合抽提方案，可检测低至 10¹ CFU/mL 的支原体。

速度快：2-4 小时内可出结果，优于传统培养法。

特异性强：引物针对支原体序列，减少其他微生物干扰。

适用范围广：可检测细胞培养上清、发酵液、纯化产物等多种样本类型。
应用场景：生物制药生产过程中的中间产物，以及细胞库、培养基的常规监控。

二、支原体培养法（经典金标准）

原理：将样本接种于含血清、酵母提取物等营养成分的特殊培养基（如 Hayflick 培养基、PPLO 培养基）中，在适宜温度（35-37℃）和气体环境下培养，观察是否出现典型的 “油煎蛋" 状菌落。
特点：

准确性高：可直接培养并鉴定活支原体，是药典（如《中国药典》3301 支原体检查法）规定的参考方法。

可进行药敏试验：若培养阳性，可进一步测试抗生素敏感性，指导污染处理。

缺点：培养周期长（需 21 天以上），操作复杂，对实验室环境和技术要求高。
应用场景：用于法规要求的最终产品放行检测。

三、指示细胞法

原理：是一种通过观察特定细胞（指示细胞）在支原体污染后的形态或功能变化，来间接检测支原体的方法。

特点：

直观性：通过细胞形态或代谢变化直接反映支原体感染，无需复杂仪器，适合基层实验室。

模拟生理环境：指示细胞与支原体的相互作用更接近实际感染场景，可检测部分难以用核酸或培养法发现的苛养型支原体。

缺点：需较高浓度的支原体（10⁴-10⁵ CFU/mL）才能观察到明显变化，易漏检早期或低水平污染；耗时较长，共培养需 3-7 天；特异性差，结果判断易受人为因素影响。

应用场景：初步筛查，在缺乏 PCR 设备的实验室中，作为支原体污染的初筛手段，尤其是细胞培养过程中的日常监控。

几种方法的对比