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CHO细胞残留检测 || 生物制品安全性
发布时间: 2024-07-28 点击次数: 346次CHO细胞在生物药品中的广泛应用
根据国家药品监督管理局公示,在国产药品中已经上市的且由CHO细胞生产的主要是涉及重组乙型肝炎疫苗、重组人促红素、重组病毒蛋白疫苗等20余种药物的生产。目前,尚未上市的就更多了。 根据美国FDA批准上市的生物药,包括了激素、酶、凝血因子、细胞因子、治疗性抗体等数十种CHO细胞标的药物。
利用重组DNA技术表达生物制品,使多肽和蛋白质可用于治疗。人们对这种表达技术的主要担忧之一,特别是在永生细胞系中,永生特性可能转移到药物的最终使用者身上。因此,可能诱发癌症。世界卫生组织(WHO)发布了指导文件,要求在CHO DNA的整个生产过程中进行监测,通过工艺验证或批次放行检测,证明其降低到安全水平。
CHO细胞残留与生物制品安全性
用于重组表达的 CHO(Chinese Hamster Ovary)宿主细胞残留很可能给生物制品造成污染。若药物研发过程不进行检测,则 无法评估是否充分去除污染物,则可能导致药物疗效降低、致癌性或引起人体免疫反应。
免疫反应:CHO细胞残留物,可能引起人体免疫反应,甚至引发严重的过敏反应。
致癌性:据文献估计,残留DNA整合到基因组中并诱发癌症的有一定概率。
疗效降低:药品中混入的生物活性物质,可能干扰抗体药物的效力,会降低疗效。
CHO细胞残留检测涉及的法规
中国药典2020版四部:3407 外源性DNA残留量测定法中新增定量PCR法
美国药典:1130 NUCLEIC ACID-BASED TECHNIQUES—APPROACHES FOR DETECTING TRACE NUCLEIC ACIDS (RESIDUAL DNA TESTING)
CHO细胞残留量
生物制品中宿主CHO细胞残留DNA既是是生产中带来的杂质,还存在一定安全隐患。因此,WHO和各国药物注册监管机构一般只允许生物制品中存在100pg/剂量以下的残留DNA。但有时根据杂质来源和工艺,特殊情况下最高允许10pg/剂量。
如何检测CHO残留DNA
人们可以通过两种方式解决生物制药过程中的残留DNA问题:(1)通过过程验证中的清除验证;(2)通过常规测试药物物质来监测残留DNA水平。
无论是否通过常规药物产品测试来确定残留DNA含量,还是通过过程验证来证明CHO残留DNA被清除,都需要量化残留DNA的分析程序。用于确定生物药残留DNA含量的分析程序可以包括杂交、基于DNA结合蛋白的仪器、定量PCR(q-PCR)或其他DNA扩增方法。
期望用于量化生物制药中残留DNA的分析程序的检测限接近每剂10pg。基于杂交、DNA结合蛋白和q-PCR的检测通常是技术,因为它们可以满足灵敏度要求。
翼和CHO 残留 DNA 检测试剂盒检测原理
Biowing® CHO 残留 DNA 检测试剂盒用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中 CHO 宿主细胞残留 DNA。采用一套引物探针在FAM通道定量检测样品中 CHO 残留 DNA,另一套引物探针在HEX通道检测内参DNA。
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