支原体污染实验室全流程防控 + 试剂盒检测实操指南

支原体一旦在实验室扩散，整批细胞、培养基全部报废，清理消杀成本高，做好 “预防 + 定期检测" 两步走，杜绝污染。

一、实验室防控关键点

1. 三区分离操作：试剂配制区、样本加样区、阳性质控专用操作台，移液器、枪头分开；

2. 操作顺序：先阴性→待测样本→最后阳性质控，阳参单独移液器，全程滤芯枪头；

3. 超净台紫外 30–45min 通风，实验前后 75% 酒精擦拭台面；

4. 新细胞、外购血清、胰酶入库前必须先做支原体检测，再入培养箱；

5. 培养箱水盘定期更换无菌水，每周消杀，阻断气溶胶传播。

二、翼和试剂盒标准实操（BPMPro100 高敏款）

1. 样本富集：2mL 细胞上清 4℃ 15000rpm 离心 10min，小心弃上清，加裂解液重悬；

2. 抽提加 IC 内标：每管加入 6μL 内部质控，监控提取效率；

3. Mix 配制：9μL 反应 Mix+1μL 探针引物，预留 1 孔损耗；

4. 每孔分装 10μL Mix，加 15μL 石蜡油封层，加入 20μL 抽提 DNA 模板；

5. ABI 程序：94℃预变性 5min，两阶段扩增，65℃收集荧光；

6. 结果判读：内参 Ct≤30 有效；样本 FAM＜37.5 为阳性，≥37.5 阴性，3 复孔两阳判定污染。

三、异常结果快速排查

1. 前处理阴性出现 FAM 扩增：抽提过程交叉污染；

2. 所有样本内参 Ct＞30：核酸抽提效率低或 PCR 体系失效；

3. 阳参 Ct＞30 但内参正常：阳性质控 DNA 降解。

全套操作 SOP、仪器参数模板可联系翼和技术领取，从防控到检测一站式解决支原体隐患。