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及时解决APOE检测试剂盒问题是保障检测结果可靠的关键

发布时间： 2025-12-23　　点击次数： 16次

　　熔解曲线法作为实时荧光PCR中验证扩增特异性的核心技术，APOE检测试剂盒凭借操作简便、成本低廉、结果直观等优势，广泛应用于病原检测、基因分型及科研分析。然而，在实际使用中，可能因试剂、操作或仪器因素导致熔解峰异常、假阳性或无信号等问题，影响判读准确性。科学识别并针对性处理APOE检测试剂盒出现的问题，是保障检测结果可靠的关键。

　　一、出现多个熔解峰或宽峰
　　原因：非特异性扩增、引物二聚体形成、模板污染或退火温度过低。
　　解决方法：
　　优化引物设计：确保Tm值匹配、避免3'端互补；
　　提高退火温度（梯度PCR摸索最佳条件）；
　　降低引物浓度（通常0.2–0.5μM），减少二聚体；
　　设置严格的阴性对照，排查试剂或环境核酸污染。
　　二、无熔解峰或荧光信号极低
　　原因：模板降解、引物失效、MasterMix失活或加样错误。
　　解决方法：
　　检查模板质量（A260/A280≈1.8，电泳完整）；
　　确认引物未反复冻融或过期，可重新稀释配制；
　　使用新批次MasterMix进行平行对照；
　　回溯加样记录，排除漏加模板或酶的失误。
　　三、熔解峰Tm值偏移（与预期偏差＞1℃）
　　原因：离子强度变化、染料批次差异、升温速率不一致或产物长度改变。
　　解决方法：
　　统一反应体系离子浓度（如Mg终浓度保持一致）；
　　同一批次实验使用同瓶MasterMix，避免染料性能波动；
　　固定熔解程序升温速率（推荐0.3℃/秒）；
　　若为突变检测，Tm偏移可能是真实SNP信号，需结合测序验证。
　　四、阴性对照出现扩增峰（假阳性）
　　多因污染或试剂交叉携带。
　　清洁移液器、台面及耗材，使用带滤芯枪头；
　　分装试剂，避免反复开盖；
　　更换新配制的无核酸酶水和引物；
　　在超净工作台中配制反应体系，严格分区操作。

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