牛源病原体的多重荧光定量PCR检测方法

牛血清中富含血浆蛋白、多肽、生长因子、激素及无机物等，被广泛应用于疫苗生产、细胞培养和生物医药等领域，可应用于医学诊断中检测病原体的抗体水平，也可作为组织培养、细胞培养和诊断试剂等重要的原辅材料。新生牛血清是从新生14小时内的小牛血液中提取的血清，经过无菌采集、分离和过滤等工艺制成，常用于疫苗以及单克隆抗体的制备，但是这种生物来源的制品，容易含有生物本体来源的病毒，特别是一些病毒类生物活性物质污染会严重影响制品的质量和安全。

由于新生牛血清中病毒来源广、种类多，因此针对新生牛血清的病毒检测是非常必要的，病毒检测的目的是力求从源头上控制牛血清中的病毒，保证新生牛血清原材料质量，保证实验和生产的顺利进行。

有报道指出,由于使用了污染牛腹泻病毒（BVDV）的胎牛血清,可导致胎牛肾细胞、牛肾细胞等多种细胞系的污染。牛腹泻病毒是疫苗生产中常见的污染物及严重的外源性致病原之一,因此实际生产过程中牛血清中BVDV的检测尤为重要。牛血清检测牛细小病毒（BPV）、 狂犬病病毒（RV）、Ⅲ型呼肠孤病毒（Reo-3）、生牛血清检测Ⅲ型牛副流感病毒 （PI3）、牛腹泻病毒（BVDV）、Ⅲ型牛腺病毒（BAV-3）等都是牛血清中重要的病原外源因子。

根据《中国药典三部》(2010版)要求:新生牛血清在生产使用前需严格检测至少6种牛源性病毒，包括牛细小病毒(BPV)、狂犬病病毒(RV)、Ⅲ型呼肠孤病毒(Reo-3)、Ⅲ型牛副流感病毒(PI3)、牛腹泻病毒(BVDV)和Ⅲ型牛腺病毒(BAV-3)。检测方法包括细胞培养法、免疫荧光抗体检查法，以及针对无法用感染试验检测的病毒采用的核酸检测法。未经病毒灭活处理的牛血清若有任何一项检测呈阳性，则不得用于生产。翼和生物建立外源性病毒的快速检测方法，通过荧光定量的方式检测牛源性病毒，将有助于把控牛血清质量,防止外源性病毒的污染。翼和生物推出的牛源病原体多重荧光PCR检测试剂盒，具有精准、灵敏、稳定、高效等特点，能够同时检测多种病原体，广泛应用于牛血清进口检测、生物制药生产以及细胞培养研究等领域,检测灵敏度可达10 copies/μL。