肺炎克雷伯菌对实验用鼠的危害与检测

肺炎克雷伯菌是革兰氏阴性杆菌，常成对或短链状排列，具有肥厚荚膜，通常无鞭毛，无动力，但有菌毛，目前已发现超过80种不同的K抗原血清型和O抗原血清型。毒力因子包括：荚膜多糖、脂多糖、菌毛、外膜蛋白、毒素（部分高毒力株可能产生如肠毒素、细胞毒素）。

肺炎克雷伯菌具有多重耐药性、广泛耐药性甚至接近全耐药性：

主要耐药机制：生成β-内酰胺酶、AmpC酶、氨基糖苷类修饰酶等酶抑制抗生素；通过氟喹诺酮类靶位改变和外排泵、脂多糖修饰等方式耐受抗生素。

耐药基因传播：耐药基因常位于质粒、转座子、整合子等可移动遗传元件上，极易在同种或不同种细菌间水平传播。

肺炎克雷伯菌可通过腹腔、呼吸道等途径感染小鼠，导致败血症和多器官衰竭。与其他应激源产生协同危害，对实验研究造成干扰：炎症指标异常、体质量下降与行为异常、病理改变混淆实验结果，毒理学、免疫学等科研实验无法正常进行。

根据中国国标GB14922-2022《实验动物微生物、寄生虫学等级及监测》肺炎克雷伯菌是SPF级大小鼠必须排除的病原体。

检测国家标准：GB/T 14926.13-2001

该标准是实验动物肺炎克雷伯菌检测的基础规范，适用于小鼠、大鼠的检测。

检测原理

基于细菌的培养特性、形态学和生化反应。

检测流程

操作步骤：样本接种DHL琼脂→36℃培养18-24小时→挑取可疑菌落（粘液状）→生化鉴定

分离培养：使用 DHL琼脂作为选择性培养基，肺炎克雷伯菌形成淡粉色光滑湿润的粘液状菌落，接种针可拉出较长的丝。

生化鉴定：二乙酰+、硝酸盐还原+、甲基红-、枸橼酸盐利用试验+、丙二酸盐+、尿素酶试验+、赖氨酸脱羧酶+、鸟氨酸脱羧酶-、靛基质-、半固体动力-。（+表示阳性，-表示阳性）

分子生物学检测（qPCR）

除国标外，分子生物学检测（qPCR）提升了检测效率和准确性：实验时间≤6小时，灵敏度高，操作步骤简单，适用于大规模筛查，如中南大学病原体检测项目将其纳入招标范围。今年新招标文件（如中南大学2025年项目）显示，分子检测方法已逐步纳入国标补充体系，被科研院校接受使用。

目前在用的翼和病原菌检测试剂盒能够很好的检测肺炎克雷伯菌在内的多种病原微生物，符合实验室的要求，使用的Biowing®Common Bacteria Primer&Probe能够匹配到目标病原微生物的DNA。