端粒酶TERT方法的合规性

目前，干细胞成瘤性的检测常用方法主要有三种，分别是裸鼠体内接种试验、软琼脂克隆试验和端粒酶活性检测。《中国药典》2020版、《人间充质干细胞》团体标准和《间充质干细胞制备及质量控制技术规范》指定裸鼠体内接种试验为标准方法，《人体细胞治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》和《间充质干细胞制备及质量控制技术规范》同时规定了裸鼠体内接种试验和软琼脂克隆试验为标准方法。但是裸鼠体内接种试验、软琼脂克隆试验两个周期非常长（裸鼠试验需16周，软琼脂克隆形成试验需21天）。

《临床研究用人间充质干细胞质量检验规范》讨论稿2.3.1成瘤性和促瘤性检测中规定，成瘤性检测是评价所检测细胞在免疫缺陷动物体内形成肿瘤的能力。除动物试验外，也可通过体外软琼脂克隆形成试验、端粒酶活性检测，对受检细胞的成瘤性风险进行间接评估。

《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）》干细胞制剂的质量研究1.2致瘤性和促瘤性章节中规定，在动物致瘤性试验不能有效判断致瘤性时，建议检测与致瘤性相关的生物学性状的改变，如细胞对生长因子依赖性的改变、基因组稳定性的改变、与致瘤性密切相关的蛋白（如癌变信号通路中的关键调控蛋白）表达水平或活性的改变、对凋亡诱导敏感性的改变等，以此来间接判断干细胞恶性转化的可能性。

中国食品药品检定有研究所所认为，端粒酶活性是判断成瘤性的良好指标；因此直接检测法（TRAP法）和间接检测法（hTERT基因表达定量）是当前端粒酶活性检测的主要检测法。

端粒酶活性和催化亚基hTERT基因表达量作为重要的肿瘤标志物，与90%恶性肿瘤呈正相关，可应用于干细胞成瘤性快检。中检院在进行干细胞制品质量复核时，也是进行端粒酶活性检查，采用端粒酶活性（TRAP法）和hTERT基因表达量的方法。