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    细胞STR鉴定,常见问题答疑

    发布时间: 2024-09-30  点击次数: 261次

    1. 报告结果中提示的多等位基因结果是什么?

    答:正常的人源细胞组织细胞其STR图谱,一个基因位点仅出现一个或2个峰。如发生细胞交叉污染现象,基因位点会出现多等位基因,即一个基因位点出现3个或以上峰。考虑到微卫星的不稳定,也不排除细胞突变的情况。

    2. 细胞匹配的判读标准是什么,怎么通过结果大致分析是否存在交叉污染?

    答:参考ATCC-ANSI细胞鉴定标准,检测细胞和已公布的数据比对,匹配度低于0.8则判定细胞和目标细胞系不匹配。匹配度在0.8-1.0之间,判定细胞基本匹配,可能存在交叉污染或者传代代次过高导致的细胞质量下滑,位点突变的情况。

    需注意,当出现3个及以上多等位基因结果时,需进一步参考数据库排查是否存在 叉污染。匹配度为1.0则样本和目标细胞匹配,且细胞质量较好。

    3. 目前小鼠细胞的STR鉴定是否可以做?

    答:目前除部分公布的小鼠细胞位点数据外,还采取自行收录标准样本的方式整合小鼠细胞数据库,市面上常见的小鼠细胞系结果均可进行鉴定。部分少见细胞系,需要通过定向数据比对的方式来确定来源。

    4. 什么是 STR?细胞系鉴定原理简单描述?STR 检测结果里边的数字是什么意思?

     答:STR:基因上的短串联重复序列分子标记(ATATATATATATAT,数字代表段串联序列重复次数)。每一株构建的细胞系都有一组特异性的 STR 数据与之对应,细胞系是否正确,检测该样本的 STR 与数据库对应的细胞系 STR 比对是否一致即可。一旦细胞系的遗传特性被确立,细胞系就应该定期的检测,以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。

    5. 什么时候需细胞系鉴定?

    1、发表文章或申请课题经费前;

    2、使用细胞进行临床治疗(试验)前;

    3、准备冻存保种或已冻存多年的细胞;

    4、一个涉及到细胞试验项目开始/结束时;

    5、新得到的细胞或实验室培养 5 代以上的细胞;

    6、细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大;细胞功能不正常;

    7,实验室新建立的细胞系;

    6 ,所鉴定的细胞系数据库没有 STR 数据参考怎么办?为什么会无匹配?原代细胞能够做细胞鉴定吗?

    答:出现匹配不上任何已知数据情况,是因为这株细胞的标准序列并没有收录在国际的细胞库之中,导致送检样本与任何的序列都不匹,或者样本是自主构建的新细胞系。没有对比数据的,按说也要检测一下 STR,只要做出来 str 数据跟数据库排查,如果最后无匹配结果,问题不大,如果跟其他细胞匹配上 比如跟 hela 匹配上就有问题。原代细胞亦可做细胞系 STR 鉴定,一方面将其 STR 与数据库做个排查。原代细胞鉴定需客户提供原始组织和原代细胞,成组检测,以原始组织的 STR 分型结果作为标准数据进行比对。

    7. 细胞鉴定已公布的数据来源?

    答:DSMZ 数据库,是整合4个国际数据库:美国ATCC、德国DSMZ、日本JCRB和RIKEN,Expasy数据库辅助判断。

    8. 细胞鉴定STR体系涵盖多少个位点?

    答:国际金标准8个STR和1个性别鉴定位点,更额外赠送12个STR位点辅助判断。

    9. 细胞鉴定STR体系是否能应用于干细胞存储领域?

    答:细胞鉴定是一种司法亲子鉴定技术,不仅可以鉴定商品化的细胞株,还能应用于干细胞来源性辅助鉴定。入库细胞和对应干细胞存储者来源是否一致,也可通过细胞鉴定来实现。

    10. 细胞鉴定STR能否分辨转染细胞株的成功率和挑选转染细胞株?

    答:目前测试下来,转染和基因改造的细胞系,STR结果基本一致,匹配度大概在0.9-1.0之间,仅通过STR的方法还是没办法做筛选稳转株的目的,建议是通过WB和基金测序,单克隆挑选来筛选想要的稳转细胞株。