品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 现货 |
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应用领域 | 医疗卫生,生物产业,制药 |
【产品规格】
1. TL25 25 次/盒
2. TL50 50 次/盒
【产品说明】
端粒长度检测试剂盒(Telomeres):是真核生物线性染色体末端的非编码串联重复性(TTAGGG)n阵列,端粒长度的变化,与衰老、癌症、或神经退行性等多种疾病相关。定量PCR法是检测端粒长度的经典技术,用时短,操作简单,结果准确,适用于批量样本检测。
本产品试剂盒采用双色荧光 qPCR(SYRBgreen+VIC)检测端粒相对长度,检测对象为血液、口腔拭子或细胞DNA。该试剂盒具有以下特点。
1. 稳定:全程闭管操作,无交叉污染。
2. 可靠:端粒与内参单管检测,减少孔间干扰。
内参基因为多拷贝,与端粒量差降低。
3. 方便:操作简单,无需电泳步骤。
4. 定量: △CT 值,可定量检测端粒相对长度。
【运输及保存条件】
低温冷冻运输, -20℃保存,有效期 1 年,冻融以后,4℃保存,有效期4周。
【产品组分】
注:本试剂盒提供试剂,使用前请上下轻柔颠倒十次混匀,后低速离心、小心开启。避免起泡。
【操作步骤】
1. 样品质控
使用商业化DNA抽提试剂盒提取血液、细胞或组织DNA,DNA纯度A260/A280≈1.8,检测样品浓度标化为15~20ng/µL,上样4µL。
注:标准品浓度已标化为15~20ng/µL,上样4µL。样品及标准品浓度过高或过低会影响扩增效率,对实验造成干扰,测量结果误差较大。
2. qPCR反应体系及条件
反应体系以20µL为例
PCR仪设置以 ABI 7500为例,其他型号定量PCR仪应通过标准品进行参数校正或咨询专业技术人员。
【基线设置】
内参基线设定:以标准品基线设定内参基线,将内参的基线设定为6~15个循环。
端粒基线设定:以标准品基线设定端粒基线,将端粒的基线设定为3~15个循环。
【阈值设置】
内参阈值设定:以标准品CT值设定内参扩增曲线阈值,将内参的 CT 值定为 21±1。
端粒阈值设定:以标准品CT值设定端粒扩增曲线阈值,将端粒的 CT 值定为13±1 。
端粒长度检测试剂盒说明:
(1)如果标准品的内参CT 值>25,但阴性对照管的内参CT 值正常, 表明试剂盒扩增效率下降或仪器运行障碍。
(2)如果阴性对照管的内参或端粒CT<25,表明在环境或加样过程中存在轻微污染。
备注:
1. 样本检测以及标准品的使用应做技术上三重复,阴性对照做单重复。
2. 如果检测样本为血液DNA,可以将所得端粒相对长度在上海翼和应用生物技术有限公司构建的1500例中国人群数据库比对,评估样本个体端粒的相对长度;若选用其他样本,建议自行构建数据库并做进一步分析。
3. 端粒长度计算方法(T/S):先分别计算标准品与样品的△CT=CT(端粒)-CT(内参)
再计算 T/S=log2 (△CT(样品)-△CT(标准品))
注:T为待测样品,S为标准品,T/S为待测样品与标准品的端粒相对长度比。
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